Eosin Methylen Blue Agar (EMBA)

Pengertian media Eosin Methylen Blue Agar ini digunakan untuk diferensiasi dari Enterobacteriaceae. Media berisi sukrosa dan laktosa. Jika organisme fermentasi sukrosa dan / atau laktosa, pH di dalam dan sekitar koloni akan jatuh di bawah pH5, menyebabkan pembentukan kompleks metilen biru eosinate yang memiliki kemilau metalik. Pada saat yang sama, koloni-koloni berwarna gelap. Sukrosa dan laktosa-koloni-negatif berwarna ungu berwarna atau cahaya dalam warna. Kehadiran Eosin kuning dan biru metilen dalam medium menghambat bakteri Gram-positif.

Komposisi 

• Bacto Pepton                     :10 g
• Laktosa                               :10 g
• Dipotassium Fosfat           :  2 g
• Bacto Eosin                       : 0,4 g
• Methylen Biru                     : 0,065 g
• Bacto Agar                         :15 g
• Akhir pH                               : 7,1 ± 0,2 pada 25 ° C 

Fungsi masing-masing komposisi

• Bacto Pepton :  Sebagai sumber nitrogen, merupakan buffer yang baik. 
• Laktosa : Menyediakan sumber karbohidrat yang dapat  difermentasi       untuk organisme koliform untuk memilah mikroba yang             memfermentasikan. 
• Dipotassium Fosfat :  Sebagai sumber buffer 
• Bacto Eosin :  Sebagai indikator 
• Methylen Biru :  Sebagai indikator 
• Bacto Agar: -

Trayek PH Eosin Metil

Indikator	Rentang pH	Transisi Interval
Eosin Y	1,0 – 3,8	Kuning – Fluorensensi Hijau
Metil blue	10,6 – 13,4	Biru - Ungu

Prinsip Eosin Methylen Blue Agar

Intisari enzimatik Gelatin adalah sumber nitrogen dalam Agar EMB, Levine. Laktosa adalah karbohidrat dan Fosfat dipotassium adalah buffer. Eosin Y dan Biru Metilen adalah indikator. Biru metilen juga merupakan agen selektif. Selama kondisi asam kuat, pewarna memberikan kemilau logam ke dalam fermentor laktosa tertentu, seperti E coli.

Beberapa Struktur Kimia

 

Media Eosin Methilene Blue

Media EMB adalah media selektif untuk bakteri gram negatif. Media ini adalah campuran dari dua zat warna, yaitu eosin dan metilen blue dalam rasio 6:1.

Kegunaan : Untuk mengisolasi dan mendeteksi Enterobacteria patogen

Komposisi (tiap 1 liter):

• Pepton                                           10,0 gram
• Dikalium Hidrogen fosfat               2,0   gram
• Laktosa                                          5,0   gram
• Sukrosa                                           5,0   gram
• Eosin yellowish                               0,4   gram
• Metilen blue                                    0,07 gram
• Agar-agar                                        13,5 gram

Cara Pembuatan

Alat     :   

• Pipet tetes
• Pipet ukur
• Neraca/ timbangan
• Waterbath
• Autoclave
• Cawan Petri
• Erlenmeyer
• Sendok reagen
• Kertas pH

Bahan  :  

• Bubuk EMB
• Aquades 200 ml
• Kapas
• KOH

Cara kerja     : 

• Siapkan alat dan bahan
• Timbang reagen 7,9 gram (sesuai dengan kebutuhan, berpedoman pada cara pembuatan media yang tertera pada botol reagen
• Ukur pH aquades 6,8 ± 0,2. Jika pH masih di bawah kebutuhan (<5 / >7) maka tambahkan HCl atau NaOH untuk menetralkan 
• Bahan yang telah ditimbang dilarutkan di dalam aquades 200 ml lalu diaduk. Karena tidak semua bahan langsung larut maka digunakan waterbath untuk melarutkannya
• Larutan yang telah larut kemudian disterilkan dalam autoclave selama 15 menit setelah mencapai suhu 121^oC
• Setelah 15 menit larutan dikeluarkan dari autoclave dan dituang ke dalam 10 plate yang telah disiapkan
• Plate yang telah diisi media kemudian disimpan sampai dingin dam padat kemudian disimpan dalam lemari es

Pertumbuhan yang khas pada media :

Media EMB mempunyai keistimewaan mengandung laktosa dan berfungsi untuk memisahkan bakteri yang memfermentasikan laktosa seperti E.coli, dengan bakteri yang tidak memfermentasi laktosa seperti S. aureus, Pseudomonas aeruginusae, dan Salmonella.

Bakteri yang memfermentasi laktosa menghasilkan koloni dengan intiberwarna gelap dengan kilap logam, sedangkan mikroba lain yang dapat tumbuh koloninya tidak berwarna.

Fermentasi laktosa menghasilkan asam, hal ini mendorong penyerapan zat warna oleh koloni, yang sekarang berwarna ungu-hitam. Bakteri yang tidak memfermentasi laktosa dapat meningkatkan pH oleh deaminasi protein, hal ini menyebabkan pewarna tidak diserap sehingga tidak berwarna.

Media

Pengertian Media

Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya.

Syarat Media

• Media harus mengandung semua nutrisi yang mudah digunakan oleh mikroba
• Media harus mempunyai tekanan osmosa, tegangan permukaan dan pH yang sesuai dengan pertumbuhannya
• Media tidak mengandung zat penghambat kecuali yang sengaja ditambahkan pada media selektif atau one purpose media
• Media harus steril
• Temperatur/ suhu nya sesuai

Klasifikasi Media  

Media berdasarkan konsistensi

• Media padat: Media yang mengandung agar 15% sehingga setelah dingin media  menjadi padat. Contohnya : Urea, KIA,Citrat,TSIA

• Media setengah padat: Media yang mengandung agar 0,3-0,4% sehingga menjadi sedikit kenyal, tidak padat, tidak begitu cair. Media semisolid dibuat dengan tujuan supaya pertumbuhan mikroba dapat menyebar ke seluruh media tetapi tidak mengalami percampuran sempurna jika tergoyang. Contohnya : SIM ,Carry and Blair 
• Media cair : Media yang tidak mengandung agar, contohnya adalah NB (Nutrient Broth), LB (Lactose Broth),TSB (Trypticase Soy Broth)

Media berdasarkan susunan kimia

• Media sintesis: Media yang komposisi zat kimianya diketahui jenis dan takarannya secara pasti, misalnya Glucose Agar, Mac Conkey Agar.

• Media semi sintesis: Media yang sebagian komposisinya diketahui secara pasti, misanya PDA (Potato Dextrose Agar) yang mengandung agar, dekstrosa dan ekstrak kentang. Untuk bahan ekstrak kentang, kita tidak dapat mengetahui secara detail tentang komposisi senyawa penyusunnya. 
• Media non sintesis Media yang dibuat dengan komposisi yang tidak dapat diketahui secara pasti dan biasanya langsung diekstrak dari bahan dasarnya, misalnya Tomato Juice Agar, Brain Heart Infusion Agar, Pancreatic Extract.

Media berdasarkan fungsi

• Media selektif/penghambat: Media yang selain mengandung nutrisi juga ditambah suatu zat tertentu sehingga media tersebut dapat menekan pertumbuhan mikroba lain dan merangsang pertumbuhan mikroba yang diinginkan. Contohnya adalah TCBS,Thayer Martin,SS,BSA

• Media diperkaya (enrichment): Media diperkaya adalah media yang mengandung komponen dasar untuk pertumbuhan mikroba dan ditambah komponen kompleks seperti darah,serum, kuning telur. Media diperkaya juga bersifat selektif untuk mikroba tertentu. Misalnya Blood Tellurite Agar, Bile Agar, Serum Agar.
• Media identifikasi: Media ini bertujuan untuk mengidentifikasi mikroba dari bakteri lainnya yang sama-sama tumbuh dalam media perbenihan berdasar karakter spesifik yang ditunjukkan pada media diferensial,misalnya TSIA ,media uji biokimia. 
• Media penyubur: Media yang menguntungkan pertumbuhan mikroorganisme tertentu karena mengandung bahan-bahan tambahan ataupun bahan penghambat yang menekan tumbuhnya kompetitor. Jenis media ini juga bertujuan untuk meningkatkan jumlah mikroorganisme yang diduga terlalu sedikit dalam bahan sampel, sehingga akan mudah untuk dihitung atau dianalisa lebih lanjut. Misalnya APW 1%,KPD,BHI.